Che cos’è l’array tomography?
L’array tomography è un metodo di microscopia volumetrica basato sul sezionamento seriale. Sezioni semi-fini di un tessuto incorporato in resina vengono tagliate utilizzando un ultramicrotomo, ordinate su griglie TEM, colorate come desiderato e osservate al microscopio. La tecnica richiede estrema dimestichezza da parte dell’operatore nella preparazione di sezioni seriali con un grande dispendio di tempo, bassa riproducibilità e la maggior parte delle volte, scarsi risultati.
ASH2 di RMC Boeckeler: il tuo migliore alleato per array tomography
L’ASH2 (Advances Substrate Holder, Figura 1) è in grado di acquisire centinaia di sezioni seriali per tomografia array ad alto volume e flussi di lavoro 3D correlati. Dotato di tre assi di orientamento, l’ASH2 fa risparmiare tempo all’utente con un rapido processo di allineamento, raccogliendo lunghi nastri di sezioni direttamente sul substrato preferito per la successiva acquisizione di immagini al microscopio ottico o al microscopio elettronico a scansione (SEM)
Progettato da RMC Boeckeler pensando alle esigenze dell’utente finale, il leggero ASH2 può essere facilmente trasportato da un ultramicrotomo all’altro per essere convertito rapidamente in un sistema di tomografia ad array.
I vantaggi dell’ASH2
Vediamo più nel dettaglio alcuni dei principali vantaggi dello strumento:
- L’ASH2 non richiede una configurazione complessa, si aggancia rapidamente a qualsiasi stage di un ultramicrotomo attuale (Figura 2), convertendolo in un sistema di raccolta di sezioni seriali per la ricostruzione in 3D della struttura d’interesse.
- Contiene il substrato scelto, dai vetrini standard ai substrati in silicio di varie dimensioni.
- La loading station accoglie il substrato sistema di bloccaggio ASH2, mantenendolo pulito.
- Può essere utilizzato con lame diamantati standard, che accettano substrati 10×25 mm.
- Per array più grandi, si può utilizzare la lama diamantata Jumbo dove posizionare substrati da 25×25 mm (Figura 3)
- Gli assi di orientamento X, Y, Z manipolano in sicurezza il substrato vicino alla base della lama.
- Il sistema di riempimento e rimozione dell’acqua fornisce il livello adeguato per il sezionamento e per una rimozione precisa dell’acqua al fine di abbassare le sezioni sul substrato.
- È capace di gestire centinaia di sezioni su un substrato.
Ulteriori vantaggi
- Time saver.
- Con ASH2 è possibile preparare un substrato di cento o più sezioni e controllare solo quel volume. Se si acquisisce il ROI, non è necessario andare oltre, grazie a un’accumulazione molto rapida di dati 3D.
- Le sezioni possono essere archiviate e riutilizzate più volte.
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- Non è necessario dosare il blocco con alti livelli di metalli pesanti prima del sezionamento, come con altre tecniche.
- Il contrasto può essere effettuato dopo il sezionamento, il che può fornire una migliore morfologia strutturale.
- Possono essere impiegate tecniche di fluorescenza per microscopia ottica.
- Sull’array è possibile anche l’immuno-labelling per Microscopia Elettronica.
- Se un wafer non è sufficiente, è possibile continuare su altri wafer per aumentare il volume.
Alcuni esempi di utilizzo di ASH2
Sotto, un esempio di una ricostruzione 3D ottenuta dal taglio della corteccia renale di un topo utilizzando l’ASH2. Le sezioni sono state preparate da Murray C. Killingsworth1-4 e Sydney e Tzipi Cohen Hyams1-3.
1Ingham Institute for Applied Medical Research, 2University of New South Wales, Sydney, 3Western Sydney University, 4New South Wales Health Pathology.
